非營(yíng)養(yǎng)性免疫增強(qiáng)劑

　　

　　放養(yǎng)密度、日常管理、廢物的積累、環(huán)境中植物群和動(dòng)物群、溶氧量、陽(yáng)關(guān)以及水溫等養(yǎng)殖環(huán)境因素可能引起慢性、亞急性或急性疾病的爆發(fā)。甲殼動(dòng)物缺乏一個(gè)真正的自適應(yīng)免疫系統(tǒng)，而是出現(xiàn)依靠各種先天條件的免疫反應(yīng)系統(tǒng)，以快速、有效地識(shí)別和摧毀“非自我”的物質(zhì)(Lee and S鰀erh鋖l, 2002)。與疫苗不同，免疫增強(qiáng)劑是通過(guò)刺激非特異性免疫應(yīng)答而提升許多動(dòng)物對(duì)傳染性疾病的免疫反應(yīng)的一類物質(zhì)。免疫增強(qiáng)劑劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣主要是用來(lái)克服在系統(tǒng)壓力或高密度養(yǎng)殖下出現(xiàn)的一些正常的免疫效果。它們可以用來(lái)預(yù)防或抑制一些可以預(yù)期的季節(jié)性爆發(fā)的疾病或者已知的一些地方性疾病、潛伏或亞致死病原體等。

　　

　　免疫增強(qiáng)劑被廣泛的分為兩大類：營(yíng)養(yǎng)免疫增強(qiáng)劑和非營(yíng)養(yǎng)免疫增強(qiáng)劑。前者包括維生素（例如維生素C，B6，E，A），礦物質(zhì)（如硒，鋅，銅），多不飽和脂肪酸（如n-3脂肪酸）等，后者則可能是化學(xué)物質(zhì)或生物代謝產(chǎn)物(Sakai, 1999)。生物來(lái)源主要包括多糖、寡糖、微生態(tài)制劑和草藥（例如，中草藥）等，化學(xué)物質(zhì)來(lái)源包括左旋咪唑，F(xiàn)K-565（庚�；�-YD-谷氨�；� - （L） - 內(nèi)消旋 - diaminopimelyl-（D）-丙氨酸）等。

　　

　　由于使用免疫增強(qiáng)劑作為飼料添加劑的研究較少，其投喂結(jié)果也沒(méi)用出現(xiàn)一貫的積極影響，因此免疫增強(qiáng)劑作為飼料添加劑的作用效果還不確定。同時(shí)部分產(chǎn)品還沒(méi)有明確的性質(zhì)和來(lái)源。免疫增強(qiáng)劑吸收代謝的機(jī)制也沒(méi)有清晰。但是，免疫增強(qiáng)劑已經(jīng)在蝦農(nóng)中被廣泛的接受應(yīng)用。

　　

　　Polysaccharides　　

　　

　　水產(chǎn)飼料中大多數(shù)免疫增強(qiáng)劑是來(lái)自細(xì)菌、真菌、酵母或者植物的多糖類物質(zhì)。這些物質(zhì)可能是細(xì)胞本身，也可能是細(xì)胞壁阻止的物質(zhì)。近年來(lái)漁業(yè)免疫增強(qiáng)劑研究的重點(diǎn)一直放在β-葡聚糖上，主要是因?yàn)樗鼈兛梢宰匀怀霈F(xiàn)，并且不會(huì)在蝦體或水體內(nèi)產(chǎn)生殘留物質(zhì)。

　　

　　β-GLUCANS　　

　　

　　β-葡聚糖是酵母、真菌和谷類植物細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的葡糖糖聚合物。它由一個(gè)主鏈β（1→3）-連接β-D-吡喃葡糖的單位，由β（1→6）-鏈接不同長(zhǎng)度和分布的側(cè)鏈而組成。β-葡聚糖的主要作用是可以綁定幾個(gè)導(dǎo)致免疫反應(yīng)產(chǎn)生受體的白細(xì)胞，從而促進(jìn)免疫反應(yīng)，可以增強(qiáng)細(xì)菌的殺傷活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，保證細(xì)胞、器官和整個(gè)動(dòng)物體的存活。

　　

　　目前許多的商品免疫增強(qiáng)劑在對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)及蝦農(nóng)中被廣泛的使用。然而，支持免疫增強(qiáng)劑使用效果的科學(xué)數(shù)據(jù)還很缺乏。Itami et al. (1998)報(bào)道指出，從嗜熱雙歧桿菌提取的β-葡聚糖可以增強(qiáng)日本對(duì)蝦對(duì)弧菌感染的抵抗力。Sung et al. (1998)等使用從酵母細(xì)胞壁提取的不同葡聚糖，β-3/1-6葡聚糖的研究得出，葡聚糖可以增強(qiáng)斑節(jié)對(duì)蝦對(duì)弧菌病及白斑綜合癥的抵抗力。另外Chang et al. (2000)等人研究得出，β-3葡聚糖添加到斑節(jié)對(duì)蝦飼料中可以增加其血細(xì)胞的吞噬活性、細(xì)胞的粘附能力以及加快超氧陰離子的產(chǎn)生速率。Tan et al. (2004)等認(rèn)為口服β-3/1-6葡聚糖可以促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)，增加機(jī)體免疫力和抗病力，此外，他們還進(jìn)一步指出0.1％β-3/1-6葡聚糖可以增加凡納濱對(duì)蝦的抗病力，0.2％β-3/1-6葡聚糖可以加快凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)(Tan et al., 2004)。

　　

　　在蝦類飼料中添加葡聚糖，除了劑量以外，添加頻率也是很重要的指標(biāo)。在Sajeevan et al. (2009)等的研究中，對(duì)從海洋酵母中提取的堿不溶性葡聚糖對(duì)念珠菌S165的免疫效果進(jìn)行了研究，對(duì)印度對(duì)蝦后期幼體分別投喂不能濃度葡聚糖（0.05，0.1，0.2，0.3，0.4g/100 g飼料）的飼料21天，以檢測(cè)其對(duì)白斑綜合癥病毒的抵抗力。結(jié)果得出在所有試驗(yàn)組中投喂含葡聚糖0.2%的飼料的試驗(yàn)組印度對(duì)蝦存活率最高。其后繼續(xù)使用葡聚糖含量為0.2%的飼料投喂，但改變?cè)擄暳系耐段诡l率，分別為每天一次，兩天一次，五天一次，七天一次以及10天一次，連續(xù)投喂40天看其對(duì)白斑綜合癥病毒的抵抗力以及存活率，結(jié)果得出每七天投喂一次含0.2%葡聚糖的試驗(yàn)組的存活率最高。這一結(jié)果與通過(guò)檢測(cè)印度對(duì)蝦總血球數(shù)、酚氧化酶活力、四氮唑藍(lán)還原能力等血液指標(biāo)得出的數(shù)據(jù)相符。這些數(shù)據(jù)表明了在對(duì)蝦中使用免疫增強(qiáng)劑的劑量和頻率。

　　

　　LIPOPOLYSACCHARIDE　　

　　

　　脂多糖（LPS）來(lái)自革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外膜。它們通常是大分子物質(zhì)，具有特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，主要有三個(gè)區(qū)域組成，分別為外多糖的區(qū)域（俗稱'O'抗原的糖殘基，為直鏈或支鏈的組成部分），一個(gè)核心多糖區(qū)（包括短鏈的糖）和一個(gè)脂肪酸含量豐富區(qū)域（即與長(zhǎng)鏈脂肪酸密切結(jié)合的糖脂區(qū)域）。高等動(dòng)物對(duì)內(nèi)毒素/LPS非常的敏感，即使很低的量也會(huì)引起高等動(dòng)物的不適，但是有報(bào)道指出低等動(dòng)物如青蛙和魚(yú)等具有耐內(nèi)毒素的能力。但是蝦類中內(nèi)毒素/LPS已發(fā)現(xiàn)是多個(gè)細(xì)菌性疾病的致病因素，特別是來(lái)自革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素。

　　

　　Sritunyalucksana et al. (1999)指出，斑節(jié)對(duì)蝦脂多糖在體外的參與機(jī)制為凝血以及抗菌活性。Takahash et al. (2000)指出對(duì)日本對(duì)蝦口服給藥脂多糖（LPS）可以增強(qiáng)器對(duì)急性病毒血癥抵抗力，并且可以促進(jìn)血淋巴對(duì)病毒發(fā)揮免疫作用。在對(duì)P. chinensis的研究中發(fā)現(xiàn)，在使用脂多糖刺激之后，其整體的血細(xì)胞數(shù)增加了83.4%，其中半顆粒細(xì)胞增加了100.4%，顆粒細(xì)胞增加了47% (Wang et al., 2005)。有研究表明，凡納濱對(duì)蝦能夠識(shí)別大腸桿菌的脂多糖并且通過(guò)相應(yīng)的刺激激發(fā)可提高酚氧化酶活性的水平，增加總血球數(shù)和提高一氧化氮的水平(Rodriguez-Ramos et al., 2008)。Okumura (2007)研究指出，凡納濱對(duì)蝦的抗菌多肽系統(tǒng)會(huì)在基因水平上會(huì)對(duì)PLS產(chǎn)生回應(yīng)，但酶源反應(yīng)系統(tǒng)沒(méi)有在基因表達(dá)水平對(duì)LPS產(chǎn)生反應(yīng)。

　　

　　OTHER POLYSACCHARIDES　　

　　

　　還有一些其他多糖類被認(rèn)為是水產(chǎn)動(dòng)物的免疫增強(qiáng)劑。Itami et al. (1998)的研究顯示，口服嗜熱雙歧桿菌產(chǎn)生的肽類物質(zhì)可以增加日本對(duì)蝦顆粒細(xì)胞的吞噬能力。Wang and Chen (2005)吸收甲殼素6μg/g或者殼聚糖4μg/g可以增加其免疫力，提高抗溶藻弧菌感染的能力。Huang et al.(2006)指出，在0.5%和1.0%兩個(gè)最佳的濃度水平連續(xù)口服羊棲菜多糖提取物14天，可以有效加強(qiáng)對(duì)蝦對(duì)弧菌的抵抗力，增強(qiáng)對(duì)蝦的免疫活性。

　　

　　Probiotics　　

　　

　　益生菌是指活的微生物或者飼養(yǎng)動(dòng)物的飼料添加劑。它可以通過(guò)抑制化合物的合成，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的競(jìng)爭(zhēng)或吸收，調(diào)節(jié)和刺激免疫功能以及改善微生物的平衡等多方面來(lái)影響動(dòng)物的機(jī)能。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，益生菌可以通過(guò)飼料添加劑或者直接潑灑在水體中來(lái)控制疾病，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，作為抗菌物質(zhì)的補(bǔ)充甚至有時(shí)候還可以取代抗菌物質(zhì)，為水生動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和共生酶類，改善水質(zhì)等。微藻（融合微藻），酵母(Debaryomyces, Phaffia, and Saccharomyces)，及革蘭氏陽(yáng)性菌（芽孢桿菌屬，肉桿菌屬，腸球菌屬，乳桿菌屬，乳球菌，微球菌屬，鏈球菌屬，和魏斯氏菌屬）和革蘭氏陰性菌（嗜水氣單胞菌，互生單胞菌，假單胞菌，弧菌）等已經(jīng)被廣泛的運(yùn)用在水產(chǎn)動(dòng)物中用以促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)存活，維持動(dòng)物機(jī)體的健康和疾病預(yù)防(Son et al., 2009)。

　　

　　大多數(shù)有益菌的研究都集中在凡納濱對(duì)蝦上進(jìn)行。在凡納濱對(duì)蝦腸道中被分離處四種菌株，分別為弧菌溶藻弧菌UTM102，枯草芽孢桿菌UTM126中，玫瑰桿菌屬 SLV03，和假單胞菌屬 SLV22，在隨后的研究中證實(shí)這四種菌株均是有益菌，可以有效的抵抗副溶血弧菌引起的凡納濱對(duì)蝦疾病(Balcazar et al., 2007)。同時(shí)在凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖中還有其他的一些微生態(tài)制劑或者作為飼料添加劑或者直接潑灑在水中，如有人在凡納濱對(duì)蝦消化道內(nèi)分離出了芽孢桿菌(Li et al., 2009)，在池塘底部分離出了凝結(jié)芽孢桿菌(Zhou et al., 2009)，在發(fā)酵大豆中分離出了枯草芽孢桿菌E20 (Tseng et al., 2009)等。

　　

　　Herbs　　

　　

　　中草藥作為傳統(tǒng)的免疫增強(qiáng)劑在中國(guó)已經(jīng)存在了幾千年的歷史。這些中草藥的活性成分很多，如多糖、生物堿以及黃酮類化合物等。在小鼠、雞以及人類細(xì)胞中中草藥作為免疫刺激劑已經(jīng)被廣泛的研究利用。近年來(lái)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中也有越來(lái)越多的人開(kāi)始關(guān)注中草藥的免疫刺激功能。

　　

　　已知可以提高魚(yú)類和貝類免疫力的中草藥主要有一下種類：（1）魚(yú)：大黃，穿心蓮，板藍(lán)根，金銀花(Chen et al., 2003)，黃芪和靈芝(Yin et al., 2009)，黃芪苷和當(dāng)歸紅芪(Jian and Wu, 2004)等。（2）鮑魚(yú)：中國(guó)傳統(tǒng)的中藥制劑，其中橘子皮（陳皮），山楂，黃芪，黨參，板藍(lán)根，蒲公英和枸杞的比例為1:1:1.5:1.5:1.5:1.5:2(Xue et al., 2008)。

　　

　　在蝦類中，Lin et al. (2006)使用不同添加量的6中中草藥混合物（菘藍(lán)，大葉青，連翹，板藍(lán)根，延胡索白皮松，廣藿香和黃芪）飼料來(lái)投喂凡納濱對(duì)蝦。結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著飼料中中草藥含量的升高凡納濱對(duì)蝦的粗蛋白表觀消化率下降，然而脂肪和磷脂的表觀消化率隨著中草藥含量的升高而升高。Yeh et al. (2008)指出樟樹(shù)的粗提取物對(duì)凡納濱對(duì)蝦來(lái)講可能是取代化學(xué)治療的一種選擇，它可以抑制病原菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)蝦的免疫力和抗病力。

　　

　　已有的數(shù)據(jù)研究表明，一些印度草藥可以提高蝦的免疫力。陸生植物蓖麻可以顯著提高印度對(duì)蝦對(duì)副溶血弧菌的抵抗力(Immanuel et al., 2004)。根據(jù)相關(guān)的研究數(shù)據(jù)可以得出，印度草藥（牙根，木橘，青牛膽茜草，黃連，旱蓮草）可以促進(jìn)斑節(jié)對(duì)蝦對(duì)白斑綜合癥病毒的抵抗力。Citarasu et al.(2006)發(fā)現(xiàn)草藥免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用可以有效的以及病毒的發(fā)病機(jī)制。