文/西南大學(xué)（榮昌校區(qū)）魚類繁殖與健康養(yǎng)殖中心 中國(guó)水產(chǎn)頻道獨(dú)家報(bào)道，過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽雖然在水產(chǎn)上應(yīng)用很久，但針對(duì)相關(guān)細(xì)菌缺少對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)。2016年，連云港永榮生物科技有限公司委托相關(guān)院校做出兩篇相應(yīng)數(shù)據(jù)，希望對(duì)同行及相關(guān)養(yǎng)殖戶有所借鑒 摘要：不同濃度條件下，試驗(yàn)了過(guò)硫酸氫鉀對(duì)5種水產(chǎn)動(dòng)物常見病原菌，包括柱狀曲撓桿菌、熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的藥物敏感性。結(jié)果表明：過(guò)硫酸氫鉀對(duì)這幾種病原菌的MIC為3.1——5.7mg/L之間，MBC為4.5——8.3mg/L之間。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1菌種 試驗(yàn)菌株選擇水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類的常見致病菌，試驗(yàn)菌株取自農(nóng)業(yè)部漁業(yè)動(dòng)植物病原庫(kù)。 G4柱狀曲撓桿菌Flexibactercalumnaris 56-12-10熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens ST78-3-3嗜水氣單胞菌A.hydrophilahydrophila 58-20-9副溶血弧菌Vibrioparahemolyticus BYK00056-11-24溶藻弧菌Vibrioalginolyticus 1.1.2試驗(yàn)藥品 試驗(yàn)藥品＂過(guò)硫酸氫鉀＂本試驗(yàn)所使用的過(guò)硫酸氫鉀由連云港永榮生物科技有限公司提供，具體產(chǎn)品信息見表1。
1.1.3培養(yǎng)基 選用肉汁胨培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl5g，H2O1000mL，pH7.2——7.4，1.05kp滅菌20min。 1.2方法 1.2.1菌懸液的制備 將各菌株接種到已滅菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24——48h后刮取菌苔，置于無(wú)菌生理鹽水中搖勻，離心2次(4500r／min，每次20min)，收集沉淀，重懸于無(wú)菌生理鹽水中，參照麥?zhǔn)媳葷峁軐⒕合♂尩郊s107CFU／mL。 1.2.2藥液配制 過(guò)硫酸氫鉀用無(wú)菌水稀釋1000mg/L備用。 1.2.3抗菌效果試驗(yàn) 1.2.3.1藥物敏感性試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn)采用濾紙片法，根據(jù)抑菌圈的大小，來(lái)判斷菌種對(duì)藥物的敏感性，是敏感，中度敏感還是耐藥。干燥紙片的制備方法：選用吸水力強(qiáng)而且質(zhì)地均勻的濾紙，用打洞機(jī)制成6mm直徑的圓紙片，120℃干燥滅菌2小時(shí)。然后把配制好的各種適宜濃度的藥液，每100張紙片加入1.0mL藥液，使它均勻浸潤(rùn)，放在無(wú)菌平皿中，37℃使它干燥，分裝小瓶中并封口，4℃保存。采用平板擴(kuò)散法將培養(yǎng)的試驗(yàn)菌株以無(wú)菌水制成約106CFU／mL的菌懸液，移取100μL菌懸液至肉汁胨固體培養(yǎng)基上，推樣器推勻，稍干后鑷取無(wú)菌圓紙片貼放于接種過(guò)試驗(yàn)菌株的平皿培養(yǎng)基表面，使每片含100μg的藥物，28℃恒溫培養(yǎng)24h后，游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑(鄭鈞鏞等，1989)，見表2。 1.2.3.2最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定試驗(yàn) 使用試管稀釋法。吸取預(yù)先配制好的藥物母液1mL，加入滅菌試管中，加無(wú)菌水至9mL，每一試管再移取菌懸液1mL(預(yù)先培養(yǎng)18h，濃度約為107cfu／mL)，混勻，28℃恒溫培養(yǎng)，24h后每管移取1mL至9mL無(wú)菌肉汁胨液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，肉眼觀察，含最小量尚呈明顯不混濁的試管所含藥物的濃度為最小抑菌濃度(MIC)，見表3，4。 1.2.3.3最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定試驗(yàn) 按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測(cè)了藥物的MIC，然后把未長(zhǎng)出菌的各個(gè)試管培養(yǎng)液分別移種到無(wú)菌平板上，培養(yǎng)后凡是平板上無(wú)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度就是最小殺菌濃度（MBC），見表4。 2結(jié)果 2.1過(guò)硫酸氫鉀對(duì)不同病原菌的敏感性 表1 不同細(xì)菌對(duì)過(guò)硫酸氫鉀的敏感性
注：S——敏感；R——不敏感。 2.2對(duì)幾株細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）試驗(yàn) 過(guò)硫酸氫鉀對(duì)5株細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)結(jié)果。“+/-”表示，2個(gè)平行組中1個(gè)為“+”、1個(gè)為“-”；“+”或“-”表示，2個(gè)平行組的結(jié)果相同，同為“+”或“-”，“+”表示有細(xì)菌生長(zhǎng)，而“-”表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。每種病原菌的每個(gè)濃度梯度均設(shè)1個(gè)不加藥物的陰性對(duì)照，以便于區(qū)別渾濁是由細(xì)菌繁殖造成還是藥物本身產(chǎn)生的渾濁，抑或細(xì)菌由于其它原因造成了死亡（表2）。
2.3對(duì)幾株細(xì)菌的最小抑菌濃度（MBC）試驗(yàn) 過(guò)硫酸氫鉀對(duì)柱狀曲撓桿菌等的MBC值見表4。  3結(jié)論 過(guò)硫酸氫鉀對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物常見病原菌有較強(qiáng)的抗菌力，過(guò)硫酸氫鉀對(duì)試驗(yàn)的5種病原菌的MIC為3.1——5.7mg/L之間，MBC為4.5——8.3mg/L之間。 此試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明連云港永榮生物科技有限公司的50%片劑及粉劑在抑菌圈及最小殺菌、抑菌濃度上都表現(xiàn)了極好的效果，這也表明了復(fù)合過(guò)硫酸氫鉀配方的重要性。 如有相關(guān)問題，可咨詢連云港永榮生物科技有限公司趙經(jīng)理15821078956。 【關(guān)鍵字】：過(guò)硫酸氫鉀 水產(chǎn)動(dòng)物 病原菌 敏感性 水產(chǎn)養(yǎng)殖 |
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